大肠杆菌培养基
培养基的基本成分
一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等（具体见教材15页“100mL牛肉蛋白胨培养基的营养构”）。
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方（即计算）
物质
牛肉膏
蛋白胨
NaCl
琼脂
水
重量
5g
10g
5g
20g
定溶至1000mL
2.称量
按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。
3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至100mL。
4.灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。
5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板（如教材17图示）。
（二）纯化大肠杆菌
微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。
1.平板划线法
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。
2.稀释涂布平板法
（1）将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释
度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行
培养。
（2）在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物
将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单
个的菌落。
（3）稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，
即系列稀释操作和涂布平板操作。
系列稀释操作
(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。
(2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。
(3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。
涂布平板操作
(1)将涂布器浸在盛有70％的酒精的烧杯中。
(2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培养基表面。
(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却
8～10s。
(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
3.培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？
培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。
有人知道念珠菌显色培养基的配方吗？
念珠菌显色培养基
成份
(g/L)
营养物质(蛋白胨等)
30.0
色素
2.9
氯霉素
0.1
琼脂
15.0
pH
6.0
±
0.2
25
℃
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意：此培养基仅供实验室使用。
用途：用于念珠菌分离和鉴定，白色念珠菌显绿色
念珠菌显色培养基根据酶底物法，通过显色来区别不同念珠菌，25-28℃培养48小时后，白色念球菌显蓝绿色，热带念珠菌显蓝灰色或铁蓝色，光滑念珠菌显紫色，克柔假丝酵母显粉色，其它念珠菌显白色，细菌被抑制。
用法：称取本品9.6g（可按4.8g/100ml的比例扩大或缩小），加入200ml蒸馏水或纯化水中，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。将加热后的培养基水浴冷却至45-50℃，轻轻地摇匀，倾入无菌平皿（9cm的15ml/皿，7cm的10ml/皿），琼脂完全凝固后，在36℃±1℃的培养箱中倒置放置0.5-1小时，备用。
注意：制备好的培养基一定要保持表面干燥，可在
37
℃的培养箱中倒置放置
1-2
小时。
贮存：制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干粉培养基应放置于阴暗干燥处，
保存温度2-8℃，注意避光保存。
来源：青岛海博生物
念珠菌显色培养基
念珠菌显色培养基用途 用于白色念珠菌分离和鉴定念珠菌显色培养基根据酶底物法，通过显色来区别不同念珠菌，25-28℃培养48小时后，白色念球菌显蓝绿色，热带念珠菌显蓝灰色或铁蓝色，光滑念珠菌显紫色，克柔假丝酵母显粉色，其它念珠菌显白色，细菌被抑制。 注意：此培养基仅供实验室使用。 用法： 称取本品9.6g（可按4.8g/100ml的比例扩大或缩小），加入200ml蒸馏水或纯化水中，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。将加热后的培养基水浴冷却至45-50℃，轻轻地摇匀，倾入无菌平皿（9cm的15ml/皿，7cm的10ml/皿），琼脂完全凝固后，在36℃±1℃的培养箱中倒置放置0.5-1小时，备用。 注意：制备好的培养基一定要保持表面干燥，可在 37 ℃的培养箱中倒置放置 1-2 小时。贮存制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干粉培养基应放置于阴暗干燥处， 保存温度2-8℃，注意避光保存。 失效：干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。 念珠菌显色培养基操作步骤 1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液； 2、取样品液涂布或划线接种于平板上； 3、25-28℃培养48h。白色念珠菌典型特征为蓝绿色，热带念珠菌显蓝灰色或铁蓝色，光滑念珠菌显紫色，克柔假丝酵母显粉色，其它念珠菌显白色,细菌被抑制。 4 、对可疑白色念珠菌菌落可划线接种到PDA琼脂平板上，25-28℃培养24-48小时，挑取单菌落做镜检和生化试验。 质量控制 1 、外观此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈乳白色。制备好的平板呈透明无色固体培养基。 2 、微生物试验 在25-30℃培养48小时：方法的局限性本培养基鉴定白色念珠菌，少数情况下可能会出现假阳性或假阴性，需做其它补充试验。 方法的局限性 本培养基鉴定白色念珠菌，少数情况下可能会出现假阳性或假阴性，需做其它补充试验。 典型特征念珠菌显色培养基典型特征为蓝绿色，热带念珠菌显蓝灰色或铁蓝色，光滑念珠菌显紫色，克柔假丝酵母显粉色，其它念珠菌显白色,细菌被抑制。
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